作为细胞染色剂之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），简称噻唑盐染料，可以自由地进入活细胞中。细胞繁殖快，其代谢旺盛，线粒体琥珀酸脱氢酶的活性增强，从而还原细胞浆中的淡黄色外源性染料为不溶性、蓝紫色结晶产物而留存在细胞内，使用特定有机化物质溶解结晶颗粒而呈现出颜色深浅，在570nm波长下产生吸收峰：吸光值与细胞量成线性正相关，反映细胞活力。

产品内容

HEPENGBIO染色液（Reagent A）    毫升
HEPENGBIO溶解液（Reagent B）    毫升
产品说明书                        1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保证6月

用户自备

酶标仪：用于定量检测染色细胞
移液排枪：用于同步加入染色试剂

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒放在室温下融化,置于暗室里。然后进行下列操作。

一、贴壁细胞检测

1. 1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
   2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
   3. 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
   4. 放进37℃培养箱里，孵育2小时（可见紫色结晶沉淀）
   5. 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培养液（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
   6. 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
   7. 放进37℃培养箱里，孵育20分钟
   8. 轻轻摇动96孔板，使其混匀
   9. 即刻放进酶标仪测读：波长570nm
   10. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数

 

• 悬浮细胞检测
  1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
  2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
  3. 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
  4. 放进37℃培养箱里，孵育4小时（可见紫色结晶沉淀）
  5. 放进孔板离心机离心10分钟，速度为300g
  6. 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培养液（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
  7. 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
  8. 放进37℃培养箱里，孵育1小时
  9. 轻轻摇动96孔板，使其混匀
  10. 即刻放进酶标仪测读：波长570nm
  11. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数

注意事项
 

1. 本产品为500次（5个96孔细胞培养板）操作
2. 操作时须戴手套
3. 整个操作须无菌操作
4. 建议96孔板里的细胞量在1000至100000范围为理想状态
5. 孵育时，须避光
6. 建议使用无细胞空对照作为背景读数，通常吸光值为0.1
7. 悬浮细胞（例如血白细胞等）需使用孔板离心，确保理想效果
8. 如果悬浮细胞不采取离心，建议悬浮细胞检测中的实验步骤8延长孵育时间到2小时或更长
9. 如果酶标仪测读的读数过低，可以继续延长HEPENGBIO溶解液（Reagent B）的孵育时间到24小时
10. 如果没有570nm的酶标仪，可以使用550至600nm波长范围的滤波器替代
11. 可以使用其它培养板检测，相应调整HEPENGBIO染色液（Reagent A）的用量，培养液和染色液的用量之比为10：1
12. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂产品

 
质量标准
 

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰