HEPENGBIO清理液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C）     微升
HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）     毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent E） 毫升
产品说明书  1份

保存方法

保存HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月

用户自备

HANKS平衡盐溶液（HEPENGBIO12022）或PBS缓冲溶液（HEPENGBIO12033）：用于清洗细胞
胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析



实验步骤
 
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D）置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C）和xx微升HEPENGBIO去干扰剂（Reagent D），混匀后标记为1号工作液；再移出xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C），混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。
 

1. 准备1瓶25cm²细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
2. 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
3. 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
4. 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
5. 加入1毫升胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
6. 置入37℃培养箱1分种
7. 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
8. 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
9. 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
10. 小心抽去上清液
11. 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
12. 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
13. 小心抽去上清液
14. 加入500微升1号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群（可以移入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管）
15. 在暗室里室温下孵育60分钟
16. 加入500微升2号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀
17. 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
18. 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上

 
注意事项
 

1. 本产品为100次操作
2. 建议操作时，在无菌状态下进行
3. 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞
4. 可用35mm培养皿或6孔培养板，细胞总量不得少于30万
5. 操作时，须戴手套
6. 孵育时，必须避免光照
7. 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过10天
8. 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
9. 细胞检测量不得少于10000个
10. 告知流式仪技术员有关细胞类型
11. 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品