神经组织髓鞘（myelin sheath）固蓝（FAST BLUE）染色试剂盒-赫澎生物研选

2375 人阅读发布时间：2023-04-05 17:52

髓鞘是白色脂肪、无生命的物质存在于神经纤维周围形成一个绝缘和保护作用的鞘。腊克沙固蓝（Luxol fast blue），又称罗克沙尔坚牢蓝或溶剂蓝38，深蓝青色粉末。系一种酞菁铜的磺酸二芳基胍盐（diarylquanidine salt of a sulphonated copper phthalocyanine）。通过酸碱反应形成盐的过程，由脂蛋白的碱性成分取代染料的碱性成分，达到染色的目的，特异性地针对含有磷脂的髓鞘质。

产品内容

HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）毫升（自备）
HEPENGBIO补水液A（Reagent B）毫升
HEPENGBIO补水液B（Reagent C）毫升
HEPENGBIO补水液C（Reagent D）毫升
HEPENGBIO补水液D（Reagent E）毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent F）毫升
HEPENGBIO平衡液（Reagent G）毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照，瓶口密闭；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月

用户自备

小型玻璃染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作
培养箱：用于切片染色孵育
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

脱蜡处理

取出10片待测的10微米厚的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
（选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
（选择步骤）室温下静置15分钟
按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸	孵育时间
xx毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液A（Reagent B）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液B（Reagent C）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液C（Reagent D）	3分钟
xx毫升HEPENGBIO补水液D（Reagent E）	3分钟

小心移去切片上的HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
小心加上xx微升HEPENGBIO补水液A（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
小心移去切片上的HEPENGBIO补水液A（Reagent B）

二、 样本染色处理

准备1个50或100毫升小型染色缸
加入适量的HEPENGBIO染色液（Reagent F）到小型染色缸里
小心放进上述脱蜡处理的切片（注意：确保切片浸泡在HEPENGBIO染色液（Reagent F））
置于60℃培养箱里孵育16小时，避免光照（注意：参见注意事项8和9）
取出切片，小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent F）
室温下，小心将切片置入新的xx毫升HEPENGBIO补水液A（Reagent B）中5次（2秒/次）
轻轻移去切片上的HEPENGBIO补水液A（Reagent B），或空气中晾干
小心加上xx微升HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
小心移去切片上的HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
小心加上xx微升HEPENGBIO平衡液（Reagent G）
室温下孵育30秒
小心移去切片上的HEPENGBIO平衡液（Reagent G）
小心加上xx微升HEPENGBIO补水液B（Reagent C）
室温下孵育30秒
小心移去切片上的HEPENGBIO补水液B（Reagent C）
小心加上xx微升HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
小心移去切片上的HEPENGBIO补水液D（Reagent E）
重复实验步骤13至17，直至可见蓝色（白质）和灰色（灰质）的对比差异
（选择步骤）进行复染操作（建议使用HEPENGBIOjia苯fen紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－HEPENGBIO80052）
放上盖玻片或封片（中性树脂）
即刻在一般光学显微镜下观察：

神经髓鞘质或髓鞘质包裹的神经纤维呈现蓝色/绿色，
如果复染，神经元呈现粉红色或紫色

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