RNA聚bing烯酰胺凝胶电泳试剂盒-赫澎生物研选

赫澎（上海）生物科技有限公司
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HEPENGBIO RNA聚bing烯酰胺凝胶电泳试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

HEPENGBIO RNA聚bing烯酰胺凝胶电泳（PAGE）试剂是一种旨在用于配制各种浓度，包括变性或非变性的聚bing烯凝胶，进行常规低分子RNA 电泳的基本技术方法。产品即到即用，无菌过滤，无核酶污染，性能稳定，高纯均一，重复性好，简化操作，建立标准化体系。

技术背景

琼脂糖（agarose）或聚bing烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis；PAGE）是分离、识别和纯化RNA分子的标准方法。聚bing烯酰胺凝胶电泳具有分辨力强，甚至可达1碱基差异；上样量大（可达10毫克），不影响其分辨力；RNA回收纯度极高。聚bing烯酰胺凝胶电泳通常分为非变性凝胶电泳（non-denaturing）和变性（denaturing）凝胶电泳。前者用于观察RNA分子的构象与迁移相关性或纯化天然（native）分子；后者用于RNA序列分析、RNA酶保护检测以及RNA标记探针（包括同位素标记）的纯化。

产品内容

HEPENGBIO基础液（Reagent A）       毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent B）       毫升
HEPENGBIO变性液（Reagent C）     克
HEPENGBIO凝结液（Reagent D）     毫升
HEPENGBIO稳定液（Reagent E）     微升
产品说明书                        1份

保存方式

保存HEPENGBIO凝结液（Reagent D）在-20℃冰箱里，HEPENGBIO变性液（Reagent C）保存在室温下；其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证3月

用户自备

无离子水：用于稀释缓冲体系
TBE缓冲液（HEPENGBIO12021）：用于电泳工作
直立电泳仪：用于电泳运行
50毫升锥形离心管：用于配制胶体液的容器
 
实验操作

实验开始前，将冰箱里的试剂置于室温下融化。然后进行下列操作。
 

1. 准备好1个50毫升锥形离心管和清洗干净的电泳槽玻璃板（注意：使用5％氯化jia在甲醇溶液里清洗）
2. 根据用户的具体要求：分离RNA分子范围，依次如下表所示加入试剂到50毫升锥形离心管里

 

百分比PAGE	HEPENGBIO基础液（Reagent A）	HEPENGBIO缓冲液（Reagent B）	分离范围（碱基）
3.5％	xx毫升	xx毫升	1000－2000
5％	xx毫升	xx毫升	80－500
8％	xx毫升	xx毫升	60－400
10％	xx毫升	xx毫升	40－200
12％	xx毫升	xx毫升	25－150
15％	xx毫升	xx毫升	6－100

 

3. （选择步骤）如果为变性电泳，加入xx克HEPENGBIO变性液（Reagent C）
4. 加入适量的用户自备的无离子水至终容量为20毫升，混匀
5. 加入xx微升HEPENGBIO凝结液（Reagent D）
6. 加入xx微升HEPENGBIO稳定液（Reagent E）（注意：如果凝结过快，可以适量减少HEPENGBIO凝结液（Reagent D）和HEPENGBIO稳定液（Reagent E））
7. 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡
8. 插入0.75毫米厚的10孔梳
9. 在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结
10. 将玻璃槽移入到电泳槽里
11. 加入用户自备的1倍TBE缓冲液
12. 小心拔去10孔梳
13. 用吸管或1毫升枪头冲洗样品孔备用
14. 接上电源
15. 电泳预运行15分钟，电压为250伏
16. 拔掉电源
17. 再次用吸管或1毫升枪头冲洗样品孔
18. 样品准备
19. 上样后继续电泳运行1小时，或直至溴酚蓝（Bromophenol Blue）染料前沿到达胶底前1厘米处
20. 进行后续操作

注意事项
 

1. 本产品为10次（10％PAGE）操作
2. 操作时，须戴手套
3. HEPENGBIO基础液（Reagent A）具有毒性，注意操作安全
4. 使用时，避免对母液的污染
5. 建议将电泳玻璃板用乙醇、甲醇以及硅化液处理
6. 本公司提供系列RNA电泳分析试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定无核酶和蛋白酶污染