乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
186 人阅读发布时间:2021-07-20 14:23
乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法 注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号:YX-W-A001
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体 60mL×1 瓶, 4℃保存; 试剂一:液体 7 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.3 mL 双蒸水充分溶解备用,配好后可分装成小管-20 ℃保存,可保存两周,禁止反复冻融;
试剂三:液体 7 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 25 mL×1 瓶,4℃保存;
丙酮酸钠标准液:液体 1 mL×1 支,4℃保存,2µmol/ml。
产品简介:
LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着 NAD+/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
- 细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液), 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);8000g 4℃ 离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
- 血清(浆)样品:直接检测。
丙酮酸钠标准液:取 100µL 标准液,倍比稀释至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL,用2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。
资料格式:
乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法.docx
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